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對于緩沖鹽，最常用的就是PB，Tris，CB(碳酸鹽)，BB(硼酸鹽)這幾種?？紤]到大部分蛋白都是pH中性條件下就很穩(wěn)定，所以PB(pH7.2-7.4)的使用最為廣泛。與磁珠的標記不同，蛋白在與NC膜接觸到被快速烘干的一個過程，蛋白的空間構(gòu)象到底發(fā)生了如何的變化，它到底是處于變性還是非變性狀態(tài)，不同的緩沖鹽對于蛋白關鍵位點的暴露到底有促進還是抑制作用，我們很難去說。所以我覺得大家在最初的研發(fā)階段，還是盡量去試一試不同的緩沖鹽。我在這里舉個例子，之前有人問到，為什么我做的試劑，測試陰性樣本，在爬膜3-5分鐘的時候，T線總是有一個模模糊糊的印跡，但是等到了15分鐘反應完成后T線就很白了，那個印跡消失了？這就跟緩沖液有一定的關系。
另外，對于磷酸鹽，也是有PB和PBS兩種，那么加氯化鈉和不加氯化鈉，有什么區(qū)別呢？對于大部分項目來說，加氯化鈉能起到一些抑制假陽的作用，但是有的項目在抑制假陽的同時，陽性的顯色也隨之降低，尤其是包被抗原的時候，氯化鈉加入與否的驗證就顯得十分必要。對于抗體的包被，很多項目加不加作用并不明顯，有的項目加入了氯化鈉，抑制假陽的同時，陽性樣本增色也很明顯，這時氯化鈉的加入就取得了錦上添花的效果。并且，對于一些抗體親和力特別強的抗體，經(jīng)常出現(xiàn)T線下深上淺的情況，氯化鈉的加入可能會有意想不到的作用。
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對于糖，用蔗糖和海藻糖的都不在少數(shù)。糖的作用，對于大部分人，在觀念里應該是起到了蛋白保護的作用，這倒是不假，尤其是海藻糖，在抗高溫方面確實有自己的優(yōu)勢。但是它們也有提高蛋白的親水性，并且還有封閉的作用。如果試劑的線條出現(xiàn)反白的情況，包被液中加入糖會有一定的改善作用(有的項目加入甲醇或者異丙醇也可以)，當然了這個作用可能并不明顯，還得靠表面活性劑去配合。對于封閉作用，可能大家了解的不多。我負責過的一些雙抗夾心的項目中，糖的加入確實明顯的改善了假陽，糖的濃度越高，這個作用越明顯，但是需要注意的是，改善假陽的同時，要注意陽性樣本的顯色變化。另外這里和大家提一下線條反白的問題，對于一些容易出假陽的項目，線條反白可能并不是壞事！
還有就是BSA和酪蛋白或者OVA、HSA等其他封閉蛋白的加入。很多人對包被緩沖液里面添加封閉蛋白持強烈的懷疑態(tài)度，覺得雜蛋白的加入會對目的蛋白的包被起競爭作用，導致目的蛋白包被不上或者包被效率低。我想說，這個你們多慮了，尤其是做小分子競爭法的項目，如果你試了，你就知道它們的加入到底有多好用。當然了，雜蛋白的用量確實是需要斟酌的，尤其是酪蛋白，用的好是錦上添花，用的不好，反而是一團亂麻。
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最后就是表面活性劑。這個東西我一直不敢輕易使用，一些同僚說是遇到過疏水特別嚴重的或者假陽特別嚴重的蛋白，加入痕量的吐溫或者Triton×100等表活就解決了。我自己試過，線條劃出來比較寬，我是不太敢輕易使用的，尤其是定量項目。如果是定性項目，我倒見過通過二次劃線來改善的，就是在T線烘干完成后，在原T線的位置重新劃一些你想添加的物質(zhì)，比如表活或者封閉劑，來抑制假陽，增加親水性。不過這種做法都是老司機了，新手全當長長見識吧。
來源：IVDdiagnosis
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