在免疫檢測(cè)試劑開發(fā)、使用過(guò)程中，干擾問(wèn)題是經(jīng)常遇到的問(wèn)題之一。今天，我們將探討干擾的概念及其分類，并描述應(yīng)對(duì)這一問(wèn)題的常用分析和解決方法。
干擾是指在臨床化學(xué)中，由于另一組分的影響或者標(biāo)本的性質(zhì)導(dǎo)致的待分析物檢測(cè)濃度的臨床顯著差異的原因。其可能由于檢測(cè)系統(tǒng)的非特異性、 指示劑反應(yīng)的阻遏、 待分析物的阻遏或者一些其它標(biāo)本依賴性偏差，在定量檢測(cè)試劑中，可能引起被測(cè)樣本濃度的顯著偏低或偏高，在定性檢測(cè)試劑中，可能引起假陽(yáng)性或假陰性，最終可能導(dǎo)致臨床醫(yī)生對(duì)患者的診斷產(chǎn)生偏差。
首先我們看看干擾主要有些什么類型：
病理情況下產(chǎn)生的代謝物，如糖尿病、 多發(fā)性骨髓瘤、 瘀膽型肝炎等；
患者治療過(guò)程中的物質(zhì)介入，如藥物，腸胃外營(yíng)養(yǎng)，抗凝劑等；
患者攝入的物質(zhì)，如酒精，藥物濫用，食物飲料等。
標(biāo)本準(zhǔn)備過(guò)程中的添加物，如抗凝劑，防腐劑，穩(wěn)定劑等；
標(biāo)本處理過(guò)程中無(wú)意引入的物質(zhì)，如手套滑石粉，收集管膠塞，手霜等；
標(biāo)本自身的基質(zhì)效應(yīng)，其理化性質(zhì)跟理想的新鮮樣本不同。
通常來(lái)說(shuō)，常見的干擾物質(zhì)主要有類風(fēng)濕因子、異嗜性抗體、人抗動(dòng)物抗體（如HAMA）、自身抗體、補(bǔ)體、生物素、溶血、脂血、膽紅素等。
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接下來(lái)看下遇到疑似干擾問(wèn)題，我們?cè)撊绾畏治觥?/span>
前面我們提到，干擾通常會(huì)引起測(cè)值的偏差或者陰陽(yáng)性的不符，當(dāng)我們遇到類似樣本或者接到客戶的反饋投訴，我們首先需確定這份樣本是真實(shí)的偏差還是由于干擾問(wèn)題導(dǎo)致的。針對(duì)有臨床信息的患者樣本，我們需結(jié)合患者情況來(lái)進(jìn)行推測(cè)可能的干擾物。比如生物素的大量服用，現(xiàn)在主要是美容、治療脫發(fā)及一些神經(jīng)性疾病，在治療神經(jīng)多發(fā)性硬化癥患者中使用的生物素含量最高，其血液中可能存在的生物素含量也最高。（如檢測(cè)系統(tǒng)使用生物素-親和素系統(tǒng)）；另外腫瘤治療中會(huì)用到一些靶向藥物及一些抗體藥物，這些藥物可能會(huì)激發(fā)人體產(chǎn)生一些異嗜性抗體；長(zhǎng)期接觸鼠類、兔類及羊類的人員也可能在體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)這些種屬的抗體。對(duì)于已知信息比較全面的樣本，我們針對(duì)可能的干擾物直接進(jìn)行檢測(cè)，比如類風(fēng)濕因子、HAMA、生物素等定量檢測(cè)試劑盒，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果來(lái)判定疑似干擾物的濃度是否能夠達(dá)到相應(yīng)的干擾程度。
另外大部分情況是未知的干擾物，針對(duì)這類樣本，首先簡(jiǎn)單有效的方法是稀釋，通過(guò)使用被測(cè)項(xiàng)目的陰性血清（濃度接近本底，同時(shí)排除基質(zhì)效應(yīng)問(wèn)題）進(jìn)行稀釋，如10倍、50倍、100倍的稀釋，通過(guò)稀釋來(lái)降低干擾物的濃度，大部分情況隨著干擾物濃度顯著降低，干擾物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾程度也隨之變化，因此回收濃度與理論濃度會(huì)存在不同程度的差異；另外我們也可以通過(guò)添加各類主動(dòng)型或者被動(dòng)型阻斷劑，以達(dá)到降低干擾的情況，這種添加阻斷劑的方式應(yīng)在平時(shí)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中就有積累，以達(dá)到不同的阻斷劑能解決不同的干擾物問(wèn)題；有時(shí)候我們也可以將稀釋和阻斷劑同時(shí)使用以達(dá)到最優(yōu)效果。但以上辦法我們均應(yīng)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中設(shè)置可靠的對(duì)照，以便于對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確判斷。
對(duì)于出現(xiàn)干擾情況，我們事后的檢測(cè)確認(rèn)已經(jīng)是迫于無(wú)奈的選擇，對(duì)于試劑盒開發(fā)人員，應(yīng)該在試劑盒設(shè)計(jì)初期就充分考慮到可能發(fā)生的干擾問(wèn)題，并且盡量的降低干擾可能發(fā)生的概率，因此在針對(duì)各類可能的干擾問(wèn)題時(shí)，我們?cè)谠噭┖虚_發(fā)過(guò)程中應(yīng)該注意部分問(wèn)題：
a.生物素干擾（在前幾期集中講過(guò)，可以考慮添加抗游離生物素抗體或增加親和素的使用量）；
b.類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體，這兩種干擾物可以與抗體的Fc片段結(jié)合，通?？梢钥紤]酶切去除抗體Fc片段來(lái)解決；
c.嗜異性抗體，一類可以與山羊、小鼠、大鼠、馬、牛IgG的Fab區(qū)域結(jié)合，但不與兔IgG結(jié)合，另一類可以與兔、小鼠、牛IgG的Fc區(qū)域結(jié)合，但不與山羊、大鼠IgG的Fc區(qū)域結(jié)合。因此可以添加大量的動(dòng)物IgG來(lái)解決，當(dāng)然應(yīng)添加足夠量并且是相同亞類的IgG；HAMA（人抗小鼠抗體）,添加大量小鼠IgG來(lái)解決，另外如果兩株抗體種屬不同，也可以避免此干擾問(wèn)題。
對(duì)于各類試劑盒開發(fā)的經(jīng)驗(yàn)心得，歡迎大家私聊交流。感謝觀看，希望有用。
文章來(lái)源于體外診斷研發(fā)大雜燴，作者LuminousZh
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編輯：Jason | 校對(duì)：Harris | 責(zé)編：Hillson
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公司簡(jiǎn)介
德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)（Institut VirionSerion GmbH）成立于1978年，是國(guó)際知名的診斷產(chǎn)業(yè)原料生產(chǎn)商和供應(yīng)商。公司的研發(fā)和生產(chǎn)基地位于德國(guó)維爾茨堡，已通過(guò)DIN EN ISO 13485質(zhì)量體系認(rèn)證，擁有三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室(P3實(shí)驗(yàn)室)。經(jīng)過(guò)了40余年的發(fā)展，公司構(gòu)建了豐富的生物原料產(chǎn)品線，主要包括天然抗原、重組抗原、人源化單克隆抗體和磁珠等。
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