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作為一名體外診斷試劑的研發(fā)人員，干擾問題是我們在工作中常面臨的一大挑戰(zhàn)。這些干擾可能會導(dǎo)致多種問題，包括降低檢測的靈敏度、影響結(jié)果的相關(guān)性，甚至導(dǎo)致假陽性或假陰性的錯誤判斷。可以說，干擾的影響是無處不在，超乎想象。在過往的文章中，我們發(fā)現(xiàn)關(guān)于干擾處理經(jīng)驗(yàn)分享的內(nèi)容往往受到廣泛關(guān)注。今天，我們再次分享一種簡便而高效的解決策略，期望能夠?yàn)楦魑恍袠I(yè)同仁提供一些有益的啟示。
大家都知道，非特異性結(jié)合力通常比特異性結(jié)合力弱。這是因?yàn)樘禺愋院头翘禺愋越Y(jié)合在本質(zhì)上存在以下差異：
- 結(jié)合位點(diǎn)的專一性：
- 特異性結(jié)合涉及抗原和抗體之間高度專一性的相互作用，這些相互作用發(fā)生在特定的、互補(bǔ)的分子結(jié)構(gòu)上，如抗原決定簇和抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。這些結(jié)合位點(diǎn)的形狀和化學(xué)性質(zhì)是高度匹配的，因此結(jié)合力很強(qiáng)。
- 非特異性結(jié)合則發(fā)生在抗原和抗體的非特異性區(qū)域，這些區(qū)域可能沒有高度互補(bǔ)的結(jié)構(gòu)，因此結(jié)合力較弱。
- 結(jié)合能量：
- 特異性結(jié)合通常涉及多種相互作用力，包括氫鍵、離子鍵、疏水作用和范德華力，這些作用力的協(xié)同作用可以產(chǎn)生較高的結(jié)合能。
- 非特異性結(jié)合主要依賴于較弱的相互作用力，如范德華力和疏水作用，這些作用力單獨(dú)產(chǎn)生的結(jié)合能較低。
- 結(jié)合的穩(wěn)定性：
- 特異性結(jié)合通常更穩(wěn)定，因?yàn)樗鼈冊谔囟ǖ慕Y(jié)合位點(diǎn)上形成，這些位點(diǎn)的設(shè)計是為了最大化相互作用。
- 非特異性結(jié)合則不太穩(wěn)定，因?yàn)樗鼈兛赡苁艿饺芤簵l件（如pH、離子強(qiáng)度和溫度）的影響較大，且容易解離。
- 結(jié)合的飽和性：
- 特異性結(jié)合通常具有飽和性，即一旦所有的特異性結(jié)合位點(diǎn)都被占據(jù)，進(jìn)一步的結(jié)合就不會發(fā)生。
- 非特異性結(jié)合可能沒有明確的飽和點(diǎn)，因?yàn)樗鼈兛梢园l(fā)生在多種不同的位點(diǎn)上，但這些結(jié)合通常較弱，容易受到競爭性結(jié)合的影響。
接下來，我們一起看下生物素–親和素系統(tǒng)，如果經(jīng)常使用這個系統(tǒng)的小伙伴肯定知道，生物素和親和素之間的結(jié)合常數(shù)非常高，是已知自然界中最強(qiáng)的非共價相互作用之一。生物素與親和素之間的親和常數(shù)（K）約為?1015mol/L。這意味著它們的結(jié)合非常穩(wěn)定、特異和迅速，比抗原與抗體之間的親和力至少高1萬倍。
最后，我們開始講重點(diǎn)，今天小編就是利用這種親和力的差異來使非特異性結(jié)合降低。由于生物素與親和素之間的親和力非常高，因此它們的反應(yīng)非?？焖?，通常在幾秒鐘到幾分鐘內(nèi)就能達(dá)到平衡。相比之下，抗原與抗體之間的反應(yīng)速度和平衡時間取決于多種因素，包括抗原和抗體的親和力、濃度、溫度以及反應(yīng)條件等。大多數(shù)抗原抗體反應(yīng)在室溫下可能需要幾分鐘到幾十分鐘才能達(dá)到平衡，但這個過程也可能因?yàn)橛H和力較低或反應(yīng)條件不利而需要更長時間。而最后的非特異性吸附，由于其最弱的作用力，往往需要更多的時間進(jìn)行反應(yīng)。
以磁微粒免疫反應(yīng)舉例，
通常的反應(yīng)順序是①加入磁微粒–抗體，被測物（抗原）；②溫育10分鐘；③洗滌；④加入HRP-抗體；溫育10分鐘；⑤洗滌；⑥加入底物，讀數(shù)。
這種反應(yīng)模式有兩個個顯著缺點(diǎn)：復(fù)雜的被測物與磁微粒反應(yīng)時間較長，使部分非特異性結(jié)合更容易產(chǎn)生；HRP-抗體與磁微粒的反應(yīng)時間較長，使HRP-抗體有一定幾率非特異性結(jié)合至磁微粒上。
改良后的反應(yīng)順序：①加入生物素–抗體，被測物（抗原），HRP-抗體；②溫育15分鐘；③加入磁微粒–親和素，溫育5分鐘；④洗滌；⑤加入底物，讀數(shù)。
總結(jié)，改良方式可以降低一定比例的非特異性結(jié)合，但并不能完全去除，如需幫助可添加文末微信及知識星球，小編期待與大家共同交流進(jìn)步。
來源于體外診斷研發(fā)大雜燴，作者大張會發(fā)光
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德國維潤賽潤（Institut VirionSerion GmbH）成立于1978年，是國際知名的診斷產(chǎn)業(yè)原料生產(chǎn)商和供應(yīng)商。公司的研發(fā)和生產(chǎn)基地位于德國維爾茨堡，已通過DIN EN ISO 13485質(zhì)量體系認(rèn)證，擁有三級生物安全實(shí)驗(yàn)室(P3實(shí)驗(yàn)室)。經(jīng)過了40余年的發(fā)展，公司構(gòu)建了豐富的生物原料產(chǎn)品線，主要包括天然抗原、重組抗原、人源化單克隆抗體和磁珠等。
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